細(xì)胞培養(yǎng)玄學(xué)-MRC-5細(xì)胞

MRC-5細(xì)胞，還有那些兄弟姐妹WI-38啥的，非常有用，廣泛應(yīng)用在病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)上，但是超級(jí)難養(yǎng)，非常讓人困擾。

zui近有人問(wèn)起了MRC-5細(xì)胞，說(shuō)實(shí)在這東西培養(yǎng)挺難的，而且充滿玄學(xué)成分?？鋸埖恼f(shuō)10個(gè)實(shí)驗(yàn)室有9個(gè)實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)不好。隔壁土豪研究所每次要用就買一批，傳代3次做完實(shí)驗(yàn)就扔了，因?yàn)樵絺髟讲顩](méi)必要留，也留不住。我們實(shí)驗(yàn)室的方法是另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室教的，他們畢業(yè)前來(lái)了新的研究生，天天跟著養(yǎng)細(xì)胞，養(yǎng)了2個(gè)月沒(méi)養(yǎng)好，操作看起來(lái)啥都沒(méi)問(wèn)題，都快哭了。我跟著學(xué)了一次，很幸運(yùn)學(xué)會(huì)了，回來(lái)傳給手下，看起來(lái)也沒(méi)問(wèn)題?？墒?span style="color:#333333;font-family:-apple-system, BlinkMacSystemFont, "Segoe UI", Roboto, "Helvetica Neue", Arial, "Noto Sans", sans-serif, "Apple Color Emoji", "Segoe UI Emoji", "Segoe UI Symbol", "Noto Color Emoji";font-size:16px;text-align:justify;text-wrap:wrap;background-color:#FFFFFF;">zui近連續(xù)復(fù)蘇3次，都是傳2代就不行了，半個(gè)月也長(zhǎng)不滿。我zui近親自復(fù)蘇了一批，還拍了照片，給大家看看吧。我們是1個(gè)T75凍存3支，所以復(fù)蘇也是直接復(fù)蘇在T75里的，復(fù)蘇三天長(zhǎng)滿，1:3傳代3天長(zhǎng)滿。其他人沒(méi)傳好的那些，復(fù)蘇3天長(zhǎng)滿，傳代后5天只能長(zhǎng)到9成，不肯再長(zhǎng)了，再傳代現(xiàn)在10天過(guò)去了，勉強(qiáng)長(zhǎng)到6成。

培養(yǎng)基其實(shí)沒(méi)啥區(qū)別，DMEM、1640、MEM我都用過(guò)，都能養(yǎng)，我現(xiàn)在用DMEM養(yǎng)，上一代沒(méi)看清楚用的1640，一樣3天長(zhǎng)滿沒(méi)任何問(wèn)題。血清用國(guó)產(chǎn)的850塊500mL一瓶的，也沒(méi)問(wèn)題，不過(guò)是別人篩過(guò)的批號(hào)，他們說(shuō)這個(gè)批號(hào)好，我們跟風(fēng)買了幾十瓶。

關(guān)鍵在于胰酶，胰酶要很弱雞的那種（自己用粉末配的都很弱雞），不含EDTA，必須含葡萄糖。一個(gè)T75放8mL泡個(gè)3min就差不多了，吸掉6.5mL，用手拍一下T75兩邊，震一下就全掉下來(lái)了。至于養(yǎng)不養(yǎng)的好，剩下的就靠個(gè)人悟性了。

好的MRC-5，一定要長(zhǎng)到這么滿才傳，這細(xì)胞有密度依賴性，太稀傳代就嗝屁了。

傳代后第貳天貼壁，長(zhǎng)這樣的，3天長(zhǎng)滿

如果傳不好第貳天貼壁后就很瘦弱，長(zhǎng)得很慢，像這樣。長(zhǎng)成這樣后，無(wú)論你再怎么努力，換再好的培養(yǎng)基、血清也沒(méi)救啦，也就勉強(qiáng)用用